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    穩(wěn)定載體時,為什么載體上通常有兩個抗性基因?

    發(fā)布時間: 2024-05-28  點擊次數(shù): 396次

    構建的載體上有兩個抗性基因,但一般只有一個抗性用來篩細胞。兩個抗性基因的本質區(qū)別是什么呢?


    我們來看看這個例子,現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質粒的圖譜,載體上有兩個抗性基因,Amp(氨芐青霉素)和Neo(新霉素)。


    氨芐青霉素是在bla啟動子驅動下表達,bla是原核表達啟動子,在大腸桿菌可以表達,因此,轉化后的質粒用Amp可以篩選出來。


    而新霉素是在SV40啟動子驅動下表達,SV40是真核表達啟動子,轉入真核細胞后表達,所以只有轉進了載體的細胞才能被篩選出來。


    所以,穩(wěn)定轉染時,載體上的兩個抗性基因,一個用于構建克隆時篩選細菌,另一個用來對轉染細胞的篩選。


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