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    WB蛋白樣本煮多久合適?

    發(fā)布時間: 2024-04-28  點擊次數(shù): 318次

    WB蛋白樣本煮制時間的那些事兒

    大家在進行 WB 實驗時,可能會有這樣的疑問:蛋白樣本到底煮多久合適呢???
    通常來說,WB 蛋白樣本的煮制時間在 3-5 分鐘左右。不過,這只是一個大致的范圍哦,具體時間還得根據(jù)實際情況來調(diào)整。
    通常6孔板細胞80%以上密度,需200ul,其他按平板面積比類推。

    在煮制蛋白樣本時,有幾點需要注意哦:

    1.煮制時間不宜過長,不然可能會導致蛋白變性,影響后續(xù)實驗結果;

    2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;

    3.煮制過程中要記得混勻樣本,確保樣本受熱均勻。

    樣品核酸、蛋白濃度過高時,煮樣后會發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來,非常粘、一砣一砣的,很容易堵住槍頭。
    這時候建議兩種處理方法:
    1.再煮5min。常規(guī)煮樣時間3-5min,樣品過濃時就煮10min;
    2.如果10min煮樣后,仍然吸不起來,才適當增加buffer,繼續(xù)煮;也可以對樣品進行超聲。煮樣時間若過長,蛋白會凝固,此時已失去繼續(xù)WB的意義,請丟棄(判斷標準:出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層)。

    如果你對煮制時間拿不準,不妨先進行預實驗,找到最恰當的煮制時間吧!


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