-
免疫熒光抗體法
發(fā)布時間： 2023-01-05 點擊次數(shù)： 699次原理
用人結(jié)腸癌細胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結(jié)腸癌細胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體 IgG（第一抗體），二者可以發(fā)生特異性的抗原抗體反應，形成抗原抗體復合物，再加入市售（也可自制）的熒光標記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復合物進一步發(fā)生抗原抗體反應（二次抗體反應），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結(jié)腸癌細胞表面的存在。材料與儀器
HeLa細胞
1640培養(yǎng)液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
蓋片 載片 培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器步驟
1. 將培養(yǎng)瓶中的結(jié)腸癌細胞接種到裝有蓋片的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)2~3天。
2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態(tài)良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。
3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。
4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。
5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。
6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。
8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。9. 將載片上滴一滴液體石蠟。然后將蓋片細胞面朝下放到載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)
- 下一篇：細胞凍存實驗
- 上一篇：神經(jīng)膠質(zhì)細胞培養(yǎng)實驗
產(chǎn)品中心
Products
